产品货号：
SYA123
中文名称：
恶性疟原虫单重荧光PCR检测试剂盒
英文名称：
产品规格：
48次/盒
发货周期：
1～3天
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一、简介：
本试剂盒用一对恶性疟原虫特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR 探针技术进行恶性疟原虫的检测。
二、用途：
本试剂盒可用于恶性疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置，还可用于恶性疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成：(48T)
四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI 系列，Bio-Rad 系列，Roche 系列等荧光定量PCR 检测仪等。
五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃保存，避免反复冻融，有效期为6个月。
六、实验操作步骤
6.1 标本采集
血液：用一次性无菌5ml 注射器抽取疑似人或动物血3-5ml，置于枸橼酸钠或EDTA2Na 抗凝管中，摇匀送检。
肺脏等组织：取上述组织1g左右，置于1.5ml洁净EP管中送检。
乳液、体液等标本：取相应标本3-5ml，转至1.5ml洁净EP管中送检。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
血液样本：直接取200μl 抗凝血，转至一洁净的1.5ml 离心管中，加入1ml 双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm 离心5min，弃上清，至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，13000rpm 离心5min，弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
肺、淋巴结等固体组织：剪取约0.1g 组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
乳液等液体标本：取标本2-3mL，13000rpm 离心3min，弃上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl进行PCR 反应。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤：
7.1 PCR 扩增
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(恶性疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
阳性对照(PTC)：均产生扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明恶性疟原虫核酸阴性。
如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行恶性疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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本试剂盒用一对恶性疟原虫特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR 探针技术进行恶性疟原虫的检测。
二、用途：
本试剂盒可用于恶性疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置，还可用于恶性疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成：(48T)
| 组份 | 数量 | 规格 |
| 恶性疟原虫荧光PCR反应液(qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(DNA Polymerase MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 恶性疟原虫阳性对照(PTC) | 1管 | 50μL/管 |
四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI 系列，Bio-Rad 系列，Roche 系列等荧光定量PCR 检测仪等。
五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃保存，避免反复冻融，有效期为6个月。
六、实验操作步骤
6.1 标本采集
血液：用一次性无菌5ml 注射器抽取疑似人或动物血3-5ml，置于枸橼酸钠或EDTA2Na 抗凝管中，摇匀送检。
肺脏等组织：取上述组织1g左右，置于1.5ml洁净EP管中送检。
乳液、体液等标本：取相应标本3-5ml，转至1.5ml洁净EP管中送检。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
血液样本：直接取200μl 抗凝血，转至一洁净的1.5ml 离心管中，加入1ml 双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm 离心5min，弃上清，至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，13000rpm 离心5min，弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
肺、淋巴结等固体组织：剪取约0.1g 组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
乳液等液体标本：取标本2-3mL，13000rpm 离心3min，弃上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl进行PCR 反应。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤：
7.1 PCR 扩增
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(恶性疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 14μL | N×14μL |
| 酶混合液 | 1μL | N×1μL |
| 总量 | 15μL | N×15μL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
阳性对照(PTC)：均产生扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明恶性疟原虫核酸阴性。
如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行恶性疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
相关搜索：恶性疟原虫单重荧光PCR检测试剂盒